强化生物反应器的种子扩增解决方案
传统的贴壁细胞病毒生产依赖于规模扩展的方法，以达到目标规模。这种方法中使用的技术包括细胞工厂和滚瓶。规模扩展病毒生产，就像任何其它类别的生物制品一样，会带来一些缺点，如产能限制、占用空间、手动操作步骤数量较多等，导致占地、资本支出、运营成本和可再现性等问题。
强化的细胞生长和病毒生产技术的出现使得公司可以通过采用自动化、强化且高产能的系统而规避上述挑战，如scale-X™生物反应器，其通过将生物质固定至具有高体积/面积比的结构化固定床生物反应器，而实现强化。此类高产能系统的使用已经将瓶颈转移到了为以足够的细胞接种这些生物反应器而需进行了种子扩增步骤上来。
市面上多种具有不同容量和自动化水平的细胞培养容器可以作为种子扩增的替代方案，用于高产能生物反应器。本文将介绍这些技术，并就如何利用这些技术为nitro规模的scale-X生物反应器接种生长细胞的解决方案提供了建议。
Scale-X 生物反应器系列
scale-X™生物反应器产品线由不同规模配置的自动化、强化的固定床生物反应器组成，以促进从研发到商业化规模GMP生产的过渡。相比其它基于贴壁细胞培养的病毒生产技术，scale-X™生物反应器的设计已被证明可获得显著更高的产量，使其成为最先进的贴壁细胞病毒载体和病毒疫苗生产技术。
scale-X™生物反应器系列可分为三组：hydro(研发规模)、carbo(中等规模、规模放大研究、临床和商业化生产)以及nitro(临床和商业化规模生产)。
图 1 Univercells Technologies 技术组合，包括hydro carbo和nitro配置以及NevoLine上游平台中的scale-X生物反应器
所用细胞的信息
不同类型的细胞可以用于scale-X™生物反应器，包括HEK293(悬浮和贴壁)、MRC5、Vero细胞、EB66、CEF、hPSC。目前，用于scale-X™生物反应器的最受欢迎的细胞是VERO细胞(疫苗应用)和HEK293(以及HEK293T)(基因治疗应用)细胞。
人胚胎肾(HEK)细胞293由于其包装能力，而被广泛应用于病毒和蛋白质生产的生物技术领域。这些细胞可用于瞬时转染和稳定转染生产工艺。HEK293细胞系构建于人胚肾，并以人5型腺病毒DNA转化。HEK293 T细胞是HEK293细胞的变种，其表达SV40 T抗原的温度敏感等位基因，而可生产含SV40 ori5的载体。HEK细胞的典型倍增时间约为20至>40小时，scale-X™生物反应器的接种密度为10,000 至30,000 cells/cm2。
种子扩增技术替代方案
可用于种子扩增以接种scale-x技术包括：细胞工厂/hyperflask细胞培养容器、微载体、振荡式生物反应器以及平板生物反应器；这些系统的特点总结如下。
表 1 用于种子扩增的“现成”候选技术
我们的接种建议
本节将为在scale-x nitro规模(200和600)上应用的种子扩增策略提供指导。这些值只是指示性的，将根据细胞类型、细胞密度、细胞活性、传代以及应用的工艺而变化。
每种种子策略所使用的参数值为:
Nitro 200
不同技术的理论种子扩增策略如下所示。
Nitro 600
不同技术的理论种子扩增策略如下所示。
Nevoline上游平台安装及操作
NevoLine™上游平台，用于病毒生产、浓缩和澄清
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