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激光捕获显微切割（LCM)能切什么？两个例子
作者：王孝养 博士
激光捕获显微切割技术(LCM)已经越来越广泛地应用于分子病理的科硏和临床精准医学的诊断中。激光显微切割能切什么呢？可以切的东东可多了。要知道详情到网上查一查资料即可。
这里将我最近做的LCM的课题和故事分享给大家。
课题一：
从人体霍奇金淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma) 组织中将里德-斯德伯格氏细胞（Reed-Sternberg cells）切出来
这个课题来自著名的大学华盛顿大学医学院的病理医生Eric. 他要求我们帮他从人体霍奇金淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma) 组织里将里德-斯德伯格氏细胞（Reed-Sternberg cells）切出来，用于DNA二代测序，以研究RS细胞的基因突变谱。我们信心满满的接下了这个课题。
首先科普一下：里德-斯德伯格氏细胞是霍奇金淋巴瘤含有的一种体积较大的独特的瘤巨细胞。 是直径20~50μm或更大的双核或多核的瘤巨细胞。瘤细胞呈椭圆形，胞浆丰富，稍嗜酸性或嗜碱性，细胞核圆形，呈双叶或多叶状，以致细胞看起来像双核或多核细胞，形态相同状如鹰眼及所谓“镜影”核。染色质粗糙，沿核膜聚集呈块状，核膜厚而清楚。核内有一非常大的，直径与红细胞相当的，嗜酸性的中位核仁，周围有空晕。目前对RS细胞的功能和价值仍有争议。下图箭头所示，就是典型的RS细胞。
把RS细胞从淋巴瘤组织分离出来也不是件容易的事。在组织中RS细胞只有5%的比例，由于做LCM时不能盖上盖玻片，这种情况下其形态学没有普通的H&E染色漂亮，要认出RS细胞也不是件松的事。尽管我们很努力，一天最多能切下500个细胞。我们花了大量时间来回寻找RS细胞。Eric要1000个细胞，结果5个标本，耗时十几天才完成。看得眼花，切得手酸，主要是给每个细胞画圈圈画酸的，想象一下，一天要圈500个RS细胞是个什么场景。
最后的测序结果出于科研保密的原因，目前无法知晓，只好等到论文发表后再细读了。
课题二：
从藤壶（barnacle）组织中分离出成熟的卵泡细胞和凋亡的卵泡细胞
这是某海军实验室的一个研究课题，这是他们在别的实验室做LCM失败后送到我们实验室的。由于我是完完全全的藤壶研究外行，至今也没搞懂他们研究的价值和意义。
估计大多数人不知道藤壶（barnacle）是什么。起初我对它也是一无所知，查了一下资料才若知一二。这是从维基百科查来的："藤壶科（学名：Balanidae）是属于节肢动物门颚足纲无柄目的一种动物。在世界各地的海岸线上都可以看到藤壶科动物。它们粘附在石崖上，有时甚至沾附在甚至蟹、贝壳、腹足纲动物或者座头鲸身上。藤壶科动物是雌雄间性的，它们可以相互受精"。
瞧一瞧，长得丑，还不温柔，干起坏事一点都不留情，就是不知道上了餐桌会是什么味道。
这就是藤壶的H&E染色后显示的组织细胞真容。可以看得出成熟有功能的卵细胞和萎缩变小了的凋亡的卵细胞。
普通H&E染色盖好盖玻片后还是容易认的，在做LCM时是不能盖上盖玻片的，要辨别出成熟和凋亡的卵细胞还是有点难度的。为了万无一失，我把海军实验室的藤壶研究专家请来，坐在我身边，我手握激光枪，他指哪我打哪。这就是传说中的“枪手”吧。
下面这个图是凋亡的卵细胞LCM过程。
这个课题耗时一整天，顺利完成了两例藤壶标本的卵细胞激光捕获显微切割。期待着能获得有价值的蛋白组学的结果。
篇幅有限，暂且聊两个课题，欲知更多相关故事，且听下回分解。亦做抛砖引玉，希望大家广泛讨论和分享心得。
作者：王孝养 博士；本期编辑：Daniel。
恒祥咨询，来自美国
专注于为中国医生和生物医药研究者提供临床科研服务
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